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本试剂盒提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制SDS-PAGE胶。本试剂盒中把凝胶配制所需的缓冲试剂、SDS等预混合成下层胶缓冲液(4X)和上层胶缓冲液(4X)，简化了凝胶配制的步骤。下层胶缓冲液中含Tris pH8.8及适量SDS，上层胶缓冲液中含Tris pH6.8及适量SDS。

• 凝胶聚合催化剂配制成10%溶液后，可分装成小管-20℃保存，通常半年内有效。同时应尽量减少室温存放时间，以防失效。
  
• TEMED Substitute易挥发，使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切，可通过适当调节凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。
  
• 温度较低时，下层胶缓冲液(4X)和上层胶缓冲液(4X)中的SDS可能析出。此时需水浴温育，并在完全溶解和混匀后使用。
  
• TEMED Substitute易燃，有腐蚀性，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其他物品。

• 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶)：
  不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围：
  

  SDS-PAGE分离胶浓度	最佳分离范围
  6%胶	50～150kD
  8%胶	30～90kD
  10%胶	20～80kD
  12%胶	12～60kD
  15%胶	10～40kD

  
  
  

  成分	配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(mL)
  6%胶	5	10	15	20	30	50
  蒸馏水	2.7	5.4	8.1	10.8	16.2	27
  30%Acr-Bis(29:1)	1.0	2.0	3.0	4.0	6.0	10.0
  下层胶缓冲液(4X)	1.25	2.5	3.75	5.0	7.5	12.5
  10%凝胶聚合催化剂	0.05	0.1	0.15	0.2	0.3	0.5
  TEMED Substitute	0.004	0.008	0.012	0.016	0.024	0.04

  
  

  成分	配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(mL)
  8%胶	5	10	15	20	30	50
  蒸馏水	2.4	4.7	7.1	9.5	14.2	23.7
  30%Acr-Bis(29:1)	1.3	2.7	4.0	5.3	8.0	13.3
  下层胶缓冲液(4X)	1.25	2.5	3.75	5.0	7.5	12.5
  10%凝胶聚合催化剂	0.05	0.1	0.15	0.2	0.3	0.5
  TEMED Substitute	0.003	0.006	0.009	0.012	0.018	0.03

  
  

  成分	配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(mL)
  10%胶	5	10	15	20	30	50
  蒸馏水	2.0	4.1	6.1	8.1	12.2	20.3
  30%Acr-Bis(29:1)	1.7	3.3	5.0	6.7	10.0	16.7
  下层胶缓冲液(4X)	1.25	2.5	3.75	5.0	7.5	12.5
  10%凝胶聚合催化剂	0.05	0.1	0.15	0.2	0.3	0.5
  TEMED Substitute	0.002	0.004	0.006	0.008	0.012	0.02

  
  

  成分	配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(mL)
  12%胶	5	10	15	20	30	50
  蒸馏水	1.7	3.4	5.1	6.8	10.2	17.0
  30%Acr-Bis(29:1)	2.0	4.0	6.0	8.0	12.0	20.0
  下层胶缓冲液(4X)	1.25	2.5	3.75	5.0	7.5	12.5
  10%凝胶聚合催化剂	0.05	0.1	0.15	0.2	0.3	0.5
  TEMED Substitute	0.002	0.004	0.006	0.008	0.012	0.02

  
  

  成分	配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(mL)
  15%胶	5	10	15	20	30	50
  蒸馏水	1.2	2.4	3.6	4.8	7.2	12.0
  30%Acr-Bis(29:1)	2.5	5.0	7.5	10.0	15.0	25.0
  下层胶缓冲液(4X)	1.25	2.5	3.75	5.0	7.5	12.5
  10%凝胶聚合催化剂	0.05	0.1	0.15	0.2	0.3	0.5
  TEMED Substitute	0.002	0.004	0.006	0.008	0.012	0.02

  
  
• 按照如下表格配制SDS-PAGE的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶)：
  

  成分	配制不同体积SDS-PAGE浓缩胶所需各成分的体积(mL)
  5%胶	2	3	4	6	8	10
  蒸馏水	1.17	1.75	2.33	3.5	4.7	5.8
  30%Acr-Bis(29:1)	0.33	0.5	0.67	1.0	1.3	1.7
  上层胶缓冲液(4X)	0.5	0.75	1	1.5	2	2.5
  10%凝胶聚合催化剂	0.02	0.03	0.04	0.06	0.08	0.1
  TEMED Substitute	0.002	0.003	0.004	0.006	0.008	0.01